Патологоанатомические изменения. У эмбрионов, погибших от пуллороза-тифа, обнаруживают воспаление желточной и хориоалантоисной оболочек, сосуды их кровенаполнены.
Печень увеличена, с серовато-белыми очажками некроза или перерождена. Нередко встречаются очаги некроза и воспаление легких.
При гибели цыплят в первые 3 дня жизни от септической формы болезни у них отмечают 1- или 2-стороннее воспаление легких, увеличение печени, переполнение желчного пузыря желчью, большой нерассосавшийся желток с уплотненным или жидким содержимым.
Наиболее типичные патологоанатомические изменения, позволяющие практически безошибочно ставить диагноз, наблюдают при остром и подостром течении пуллороза-тифа у молодняка птиц. При вскрытии трупов цыплят, индюшат обнаруживают множественные очаги некроза в печени, сердце, легких, серозный или серозно-фибринозный перикардит, перерождение печени, застой и воспаление легких. Почки увеличены, мочеточники заполнены мочекислыми солями. Слизистая оболочка кишечника воспалена, просвет слепых отростков кишечника заполнен серовато-белой творожистой массой, часто с прожилками крови. При клеточном содержании молодняка, особенно бройлеров, нередко поражаются суставы ног.
У взрослых кур и индеек бывают поражены главным образом яичники и реже встречаются изменения в печени, селезенке и других внутренних органах (при подостром течении). Содержимое яичных фолликулов плотное или, наоборот, разжижено, вследствие чего пораженные фолликулы деформированы.
Воспаление и разрыв оболочек пораженных фолликулов яичника часто служат причиной перитонита и воспаления яйцевода у кур — носителей возбудителя пуллороза-тифа. У самцов иногда бывают поражены семенники.
Диагноз на пуллороз-тиф ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомичееких изменений и результатов серологического и бактериологического исследований. Хотя течение болезни, ее симптомы и патологоанатомические изменения характерны, а показания кровекапельной и пробирочной реакции с пуллорным эритроцитарным антигеном высокоспецифичны, тем не менее в хозяйствах, ранее благополучных по данной болезни, окончательный диагноз на пуллороз-тиф ставят только по результатам бактериологического исследования.
Для выделения культуры возбудителя пуллороза-тифа делают высевы из погибших эмбрионов (хориоалантоисной жидкости и желтка), крови сердца, печени, желчи и костного мозга (большеберцовой и бедренной кости) павших цыплят на мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар, на среду Эндо. Питательные среды с посевами выдерживают при температуре 37—40 °С в течение 24—48 ч. Идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводят в капельной реакции агглютинации на стекле с монорецепторными агглютинирующими сальмонеллезными О- и Н-сыворотками и микроскопией мазков культур, окрашенных по Граму.
Ввиду большой вариабельности ферментативных свойств штаммов Sal. gallinarum-pullorum на средах Гисса (цветной ряд) они не носят принципиальный характер при идентификации возбудителя.
При бактериологическом исследовании трупов взрослых птиц высевы на питательные среды делают из печени, желчи, селезенки, костного мозга и обязательно из деформированных фолликулов яичников.
Если необходимо подтвердить показания серологической реакции бактериологически, высевы у реагировавших кур и индеек производят только из воспаленных или перерожденных фолликулов яичника, печени, желчи, так как у взрослой птицы возбудитель чаще всего локализуется в яичниках. Вероятность выделения возбудителя из других органов очень мала, тогда как из яичников в 70—80% случаев его удается выделить.
При жизни птиц массовую диагностику пуллороза-тифа проводят методом кровекапельной реакции на стекле с эритроцитарным антигеном. Этот метод диагностики применяют не только для постановки диагноза на пуллороз-тиф, но и как мероприятие по ликвидации первичного источника возбудителя пуллороза-тифа (птиц — носителей Sal. gallinarum-pullorum) в хозяйстве, и как метод контроля благополучия птицепоголовья по пуллорозу-тифу.
Несмотря на высокую чувствительность пуллорозного эритроцитарного антигена, при постановке кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации соблюдают условия, которые могут влиять на показания реакции.
Температура воздуха в помещении, где исследуют птицу, должна быть не ниже 16—18 °С, а на грелке-качалке — 37—42 °С. При более низкой температуре на грелке-качалке и при невысоком уровне антител в крови реакцию на стекле в течение двух минут визуально можно не заметить. Температура 45 °С и выше сама по себе не влияет на результаты реакции отрицательно, при такой температуре часто высыхает капля крови и антигена на стекле, что затрудняет учет реакции.
Предметные стекла должны быть чистыми и обезжиренными.
Соотношение крови и эритроцитарного антигена должно быть 1:1, т. е. к одной капле антигена добавляют одну каплю крови. Результаты реакции оценивают через 2 мин после тщательного смешивания антигена и крови при плавном легком покачивании грелки-качалки.
Кровь для исследования берут из гребешка или подкрыльцовой вены (предпочтительнее из подкрыльцовой вены). Последовательность нанесения на предметное стекло крови и антигена не влияет на показания реакции.
Диагностическая ценность серологической реакции с любым антигеном по многом зависит от того, в каком возрасте проводят исследование птицы на пуллороз-тиф.
Возраст цыплят, в котором удается выявить наибольшее количество носителей возбудителя пуллороза-тифа, 50—55 дней, а индюшат — 45—50 дней.
Первое исследование на пуллороз-тиф взрослой птицы проводят по достижении 40—45% яйценоскости в стаде. Если не было выявлено положительно реагирующей птицы и хозяйство в течение ряда лет свободно от пуллороза-тифа, дальнейшее исследование взрослой птицы проводят через каждые 3 месяца с охватом 10% поголовья каждого птичника.